將待檢測的樣品，準確稱取0.5克，量取99.5mL無菌生理鹽水稀釋，（此次稀釋了200倍，即0.5克樣品，稀釋到了100克水溶液），再加入滅菌玻璃珠20～30粒，于250mL三角瓶中，置于振蕩器或搖床上劇烈搖晃30分鐘以上，目的是將粘連在一起的乳酸菌細胞打散，分散開來。
根據所待檢測的樣品可能的乳酸菌含量，進行適當的稀釋操作，例如如果估計樣品的含乳酸菌活菌數為200億/克左右，則建議稀釋2億倍，這樣將來在90mm平板上培養時，會長出大約100個乳酸菌落，比較便于計數，總之，控制平板培養皿上的乳酸菌落數量在30～300個的范圍內，比較便于計數。
我公司“強微”牌乳酸糞腸球菌系列產品，含乳酸菌活菌數的分析保證值均在100～300億/克范圍內（剛出廠的則在240--720億/克以上），所以，建議稀釋2--3億倍以上即可。
即事先配制好，并滅菌處理的檢測用瓊脂培養基，在水浴鍋內保持50℃的溫度，使瓊脂培養基呈溶解狀態，置于操作臺旁邊備用；（養殖戶可先不從壓力鍋中取出，在壓力鍋維持一定的溫度，從而也不會凝固）
在無菌條件下（打開超凈工作臺無菌風，或養殖戶點上酒精燈），將稀釋了2億倍的乳酸菌液，用移液管移取1mL ，于培養皿中，再在此培養皿中倒入前述保持溶解狀態的檢測培養基液15mL左右（倒培養基時，估計能覆蓋滿平皿的液體量即可），然后，蓋好培養皿蓋，輕輕轉動平皿，原地轉幾圈，使培養基液與乳酸菌液混合均勻，等數分鐘后，待培養基凝固后，可移入培養箱中進行培養；
將前面倒制好的平板，倒轉（即蓋子在下面），放于培養箱中，于33℃溫度下，培養2～3天，待培養皿平板中長出比較明顯的，帶有透明圈的菌落時，即可進行計數，得出檢測結果。
用于檢測乳酸菌的培養基配方為：蛋白胨15g，牛肉膏5g，葡萄糖20g，氯化鈉5g，碳酸鈣10g，瓊脂粉10g，水1000ml，115～121℃滅菌20min，滅菌后放置水浴50℃保溫備用。
① 其中瓊脂的用量只有1%，比常規瓊脂培養基的2%用量少了一半，目的是降低瓊脂凝固溫度，為了在倒制平板時，使培養基能在較低的溫度下與熱敏性的乳酸菌混合，并一直呈溶解狀態，混合均勻后，才慢慢凝固；
② 同時，添加了1%的碳酸鈣，由于碳酸鈣難溶于水，所以，加入碳酸鈣后的瓊脂平板培養基為混濁狀態，為的是在將來培養乳酸菌時，乳酸菌在培養過程中產生乳酸，把菌落周圍的難溶性的碳酸鈣溶解，成為可溶性的乳酸鈣，并使菌落周圍的培養基變得透明，在菌落周圍產生透明圈，從而判斷其為乳酸菌。
四、針對正規實驗室的檢測方法
4. 檢測步驟（針對正規實驗室）
4.1 先準備干熱滅菌的物品（針對正規實驗室）
干熱滅菌是指在恒溫干燥滅菌箱中，以140℃以上的干熱空氣，對箱內物品進行消毒滅菌，主要用于玻璃儀器的滅菌處理。
用報紙（最好有牛皮紙）和橡皮筋等包扎好如下物品：“培養皿、1mL移液管”；根據要檢測的樣品的數量，決定包扎的玻璃儀器的數量。包扎效果見圖示。
以及準備好相應數量的250mL三角瓶，一個樣品需要至少4個三角瓶；
將上述三角瓶，以及包扎好的培養皿，移液管等，放入恒溫干燥滅菌箱中，于140℃以上滅菌3小時以上。備用。
4.2 再準備好濕熱滅菌的物品（針對正規實驗室）
濕熱滅菌是指在滅菌鍋內，通過加熱產生飽和壓力水蒸汽，對物品進行滲透滅菌的過程，主要用于配制好的培養基滅菌，無菌水制作等的消毒處理。
① 平板（或叫培養皿）培養基的配制
用于檢測乳酸菌的培養基配方為：蛋白胨15g，牛肉膏5g，葡萄糖20g，氯化鈉5g，碳酸鈣10g，瓊脂粉10g，水1000ml，溶解于250或500mL三角瓶中，再放入滅菌鍋內消毒滅菌處理，115～121℃滅菌20min，滅菌后放置水浴50℃保溫備用。
② 無菌生理鹽水的配制
通常檢測一個樣品，需要用到至少400毫升無菌生理鹽水，據此，計算您的需要量，配制好后，進行滅菌處理。
生理鹽水含氯化鈉0.85%，即稱取0.85克氯化鈉，溶解于100毫升水中即可，然后，放于滅菌鍋內滅菌處理。備用。
4.3 樣品的制備（針對正規實驗室）
4.3.1 乳酸菌懸液的制備
將待檢測的樣品，準確稱取0.5克，量取99.5mL無菌生理鹽水稀釋，（此次稀釋200倍），再加入滅菌玻璃珠20～30粒，于250mL滅菌三角瓶中，在搖床上于180rpm轉速下，搖晃30分鐘以上，目的是將粘連在一起的乳酸菌細胞打散，分散開來。
4.3.2 用生理鹽水稀釋到2億倍
用1mL的移液管，移取1mL 上述菌懸液，移入250mL滅菌三角瓶中，再加入99mL無菌生理鹽水，搖晃均勻，即此次操作稀釋了100倍，前述乳酸菌懸液的制備時，已稀釋了200倍，則一共稀釋了2×104倍；
再用新的移液管和新的250mL滅菌三角瓶，取上述稀釋液，再重復上述操作，再稀釋100倍，則稀釋了2×106倍；
再用新的移液管和新的250mL滅菌三角瓶，取上述稀釋液，再重復上述操作，再稀釋100倍，則稀釋了2×108倍；即2億倍。
4.4 倒制平板，即接種（針對正規實驗室）
倒制平板在超凈工作臺上進行，以保持無菌環境中操作；
把事先配制好，并滅菌處理后的檢測用培養基，在水浴鍋內保持50℃的溫度，置于操作臺旁邊備用；
取事先干熱滅菌處理后的90mm培養皿（也叫平板）若干、1mL移液管若干，置于操作臺上備用；
在無菌條件下（打開超凈工作臺無菌風），將稀釋了2億倍的乳酸菌液，用移液管移取1mL ，于培養皿中，再在此培養皿中倒入前述保持溶解狀態的檢測培養基液15mL左右（倒培養基時，估計能覆蓋滿平皿的液體量即可），然后，蓋好培養皿蓋，輕輕轉動平皿，原地轉幾圈，使培養基液與乳酸菌液混合均勻，等數分鐘后，待培養基凝固后，可移入培養箱中進行培養；
4.5 培養箱中進行培養
將前面倒制好的平板，放于培養箱中，于33℃溫度下，培養2～3天，待培養皿平板中長出比較明顯的，帶有透明圈的菌落時，即可進行計數，得出檢測結果。
4.6 計數
從培養箱中取出培養好的平板，用記號筆為計數工具，在平板的背面進行計數，如室內光線不好，必要時，將培養皿對著燈光進行計數；
在培養好的平板上，凡是帶有透明圈的菌落，才算是乳酸菌菌落，不然，就不是乳酸菌，我們計數，也就是計算這些帶有透明圈的菌落數。
每計數一個菌落，就用記號筆在平板背面相應位置點一下，留下一個記號痕跡，一直將平板上所有的帶有透明圈的菌落全部數完為止。
記錄計數值。
4.7. 結果計算
計算公式：
樣品中含活的乳酸菌數量（億個/克，或億cfu/g）= 計數值×2
五、針對養殖戶或中小飼料廠的簡單檢測方法
5. 檢測步驟（針對養殖戶或中小飼料廠）
養殖戶或中小飼料廠，如果沒有干燥滅菌箱，可以將全部需要滅菌消毒的物品，都用濕熱滅菌法消毒
，即都使用蒸飯用的壓力鍋消毒即可。
注意：壓力鍋消毒時，要事先在壓力鍋內墊上一個鋁墊片，支起一個內膽，在內膽中放置待消毒物品，墊片處放清水作為蒸汽發生用水，具體見圖未：
濕熱滅菌是指在壓力鍋內，通過加熱產生飽和壓力水蒸汽，對物品進行滲透滅菌的過程。
5.1 再準備好壓力鍋中需要滅菌的物品（針對養殖戶或中小飼料廠）
① 平板（或叫培養皿）培養基的配制
用于檢測乳酸菌的培養基配方為：蛋白胨15g，牛肉膏5g，葡萄糖20g，氯化鈉5g，碳酸鈣10g，瓊脂粉10g，水1000ml，溶解于250或500mL三角瓶中，再放入壓力鍋內消毒滅菌處理，上汽后保持滅菌25min，滅菌后備用。
因為倒制平板時，需要溶解狀態的培養基，而養殖戶往往沒有水浴鍋來保持培養基的溫度達到45～50℃，這是個問題，建議養殖戶，在最后來操作這一步，即所有其他的東西都準備好后，最后來滅菌平板培養基，待它冷卻到手感微燙時，直接用來倒制平板。
② 無菌生理鹽水的配制
通常檢測一個樣品，需要用到至少400毫升無菌生理鹽水，據此，計算您的需要量，配制好后，進行滅菌處理。
生理鹽水含氯化鈉0.85%，即稱取0.85克氯化鈉，溶解于100毫升水中即可，然后，放入壓力鍋內消毒滅菌處理，上汽后保持滅菌25min，滅菌后備用。
③ 其他需要壓力鍋滅菌處理的物品
用報紙（最好有牛皮紙）和橡皮筋等包扎好如下物品：“培養皿、1mL移液管”；根據要檢測的樣品的數量，決定包扎的玻璃儀器的數量。包扎效果見圖示。
以及準備好相應數量的250mL三角瓶，一個樣品至少需要4個三角瓶；
將上述三角瓶，以及包扎好的培養皿，移液管等，放入壓力鍋內消毒滅菌處理，上汽后保持滅菌25min，滅菌后備用。
5.2 樣品的制備（針對正規實驗室）
5.2.1 乳酸菌懸液的制備
將待檢測的樣品，準確稱取0.5克，量取99.5mL無菌生理鹽水稀釋，（此次稀釋200倍），再加入滅菌玻璃珠20～30粒，于250mL滅菌三角瓶中，養殖戶沒有搖床，只能辛苦點，用手握好三角瓶，用力搖晃30分鐘以上，目的是將粘連在一起的乳酸菌細胞打散，分散開來。
5.2.2 用生理鹽水稀釋到2億倍
用1mL的移液管，移取1mL 上述菌懸液，移入250mL滅菌三角瓶中，再加入99mL無菌生理鹽水，搖晃均勻，即此次操作稀釋了100倍，前述乳酸菌懸液的制備時，已稀釋了200倍，則一共稀釋了2×104倍；
再用新的移液管和新的250mL滅菌三角瓶，取上述稀釋液，再重復上述操作，再稀釋100倍，則稀釋了2×106倍；
再用新的移液管和新的250mL滅菌三角瓶，取上述稀釋液，再重復上述操作，再稀釋100倍，則稀釋了2×108倍；即2億倍。
5.3 倒制平板，即接種（針對正規實驗室）
養殖戶沒有超凈工作臺，倒制平板在酒精燈的火焰旁邊進行，但必須有一個比較干凈的操作臺，如瓷板操作臺面上操作，以保持無菌環境中操作；
5.3.1 保持平板培養基的溶解狀態
因為倒制平板時，需要溶解狀態的培養基，而養殖戶往往沒有水浴鍋來保持培養基的溫度達到45～50℃，這是個問題，建議養殖戶，在最后來操作這一步，即所有其他的東西都準備好后，最后來滅菌平板培養基，待它冷卻到手感微燙時，直接用來倒制平板。
5.3.2 倒平板操作
取事先干熱滅菌處理后的90mm培養皿（也叫平板）若干、1mL移液管若干，置于操作臺上備用；
在無菌條件下（點上酒精燈，盡量在避風處，空氣干燥清爽的環境中，以及比較干凈的瓷板操作平臺上操作），將稀釋了2億倍的乳酸菌液，用移液管移取1mL ，于培養皿中，再在此培養皿中倒入前述保持溶解狀態的檢測培養基液15mL左右（倒培養基時，估計能覆蓋滿平皿的液體量即可），然后，蓋好培養皿蓋，輕輕轉動平皿，原地轉幾圈，使培養基液與乳酸菌液混合均勻，等數分鐘后，待培養基凝固后，可移入培養箱中進行培養；
注意以上操作，盡量在酒精燈的火焰旁邊操作。
待平板中的培養基，冷卻凝固后，移入培養箱中進行培養。
5.4 進行培養
將前面倒制好的平板，放于培養箱中，于33℃溫度下，培養2～3天，待培養皿平板中長出比較明顯的，帶有透明圈的菌落時，即可進行計數，得出檢測結果。
如果養殖戶沒有培養箱，也可以在仔豬或雛雞保溫箱中進行培養，熱源采用紅外燈熱源，但注意要使用干凈的箱子或容器來培養。
5.5 計數
從培養箱中取出培養好的平板，用記號筆為計數工具，在平板的背面進行計數，如室內光線不好，必要時，將培養皿對著燈光進行計數；
在培養好的平板上，凡是帶有透明圈的菌落，才算是乳酸菌菌落，不然，就不是乳酸菌，我們計數，也就是計算這些帶有透明圈的菌落數。
每計數一個菌落，就用記號筆在平板背面相應位置點一下，留下一個記號痕跡，一直將平板上所有的帶有透明圈的菌落全部數完為止。
記錄計數值。
5.6. 結果計算
計算公式：
樣品中含活的乳酸菌數量（億個/克，或億cfu/g）= 計數值×2
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